Plasmide CRISPR/Cas9 KO USF-1 (m): sc-423628

Présentation

Le facteur de transcription amont 1 (USF‑1), codé par le gène murin *Usf1*, est un facteur de transcription de type hélice–boucle–hélice basique avec fermeture éclair à leucines, qui se lie aux motifs E‑box afin de coordonner des programmes d’expression génique contrôlant le métabolisme, la croissance et les réponses au stress. USF‑1 intègre des signaux de diverses voies pour réguler des réseaux transcriptionnels impliqués dans l’homéostasie des lipides et du glucose, la fonction mitochondriale et la progression du cycle cellulaire, souvent via des interactions avec des co‑régulateurs et des complexes de modification de la chromatine. Dans les systèmes murins, une activité altérée de *Usf1* a été associée à des phénotypes métaboliques dérégulés et à une signalisation inflammatoire, pertinents pour l’étude des traits cardiométaboliques et de la régulation génique hépatique. En tant que régulateur transcriptionnel largement exprimé, USF‑1 est fréquemment étudié pour ses rôles dans le contrôle transcriptionnel, la communication entre enhancers et promoteurs, et les interactions entre voies de signalisation à l’origine de la susceptibilité aux maladies complexes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO USF-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Usf1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Usf1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Usf1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine USF-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Usf1 pour l'étude de la signalisation de USF-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Usf1 essentiels à la fonction de USF-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Usf1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le USF-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le USF-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Usf1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le USF-1 plasmide HDR (m) et le USF-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Usf1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Usf1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.