Plasmide CRISPR d'Activation (h) urocortin: sc-403604-ACT

Le gène UCN humain code l’urocortine, un neuropeptide sécrété de la famille du facteur de libération de la corticotropine (CRF) qui signale principalement via CRHR2 et CRHR1 afin de moduler des programmes transcriptionnels dépendants de l’AMPc/PKA. L’urocortine participe aux réponses neuroendocrines au stress et coordonne des processus cellulaires, notamment la sécrétion, l’adaptation métabolique et la signalisation inflammatoire, dans des tissus centraux et périphériques. Par l’intermédiaire des voies des récepteurs du CRH, UCN influence le tonus vasculaire, la fonction gastro-intestinale et la physiologie cardiaque, ce qui relie son expression à des études sur la biologie du stress et la régulation cardiométabolique. Des altérations de la signalisation de l’urocortine ont été étudiées dans des contextes tels que des phénotypes liés à l’anxiété et à la dépression, l’insuffisance cardiaque et des affections inflammatoires, étayant des recherches mécanistiques sur la dysrégulation de l’axe CRH.

urocortin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de UCN sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

urocortin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus UCN dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription UCN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de urocortin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus UCN natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de urocortin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie urocortin dans les cellules tumorales présentant une expression de UCN silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.