Particules Lentivirales d'Activation (h) URE-B1: sc-404890-LAC

HUWE1 code pour URE-B1, une ligase E3 ubiquitine de type HECT qui régule la protéostasie en catalysant la dégradation, dépendante de l’ubiquitine, de multiples facteurs de signalisation et de réponse aux dommages de l’ADN. En contrôlant l’ubiquitination, HUWE1 influence l’apoptose, la progression du cycle cellulaire et la stabilité du génome, en s’intégrant à des voies liées à la signalisation p53 et à des programmes transcriptionnels sensibles au stress. Une activité ou une expression dérégulée de HUWE1 a été associée à une prolifération altérée et à des défauts de réparation de l’ADN dans divers contextes pathologiques, ce qui en fait un nœud clé pour l’étude de la signalisation médiée par l’ubiquitine et de l’homéostasie transcriptionnelle. Son large réseau de substrats permet d’explorer les mécanismes par lesquels la dynamique de l’ubiquitine façonne les décisions de destinée cellulaire.

Les particules d'activation lentivirales URE-B1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de HUWE1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales URE-B1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription HUWE1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de URE-B1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif HUWE1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.