URE-B1 Double Nickase Plasmid (h): sc-404890-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das URE-B1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- URE-B1 Double-Nickase-Plasmid (h) und URE-B1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HUWE1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
URE-B1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404890-NIC | 20 µg | $410.00 |
HUWE1 kodiert das menschliche Protein URE-B1, eine HECT-Domänen-E3-Ubiquitin-Ligase, die den Transfer von Ubiquitin katalysiert und dadurch Protein-Stabilität sowie die Stärke von Signalwegen reguliert. URE-B1 beeinflusst Proteostase und Stressantworten, indem es zentrale Regulatoren der Apoptose und der DNA-Schadenssignalgebung adressiert, darunter Signalwege, die mit der p53-Dynamik, der Zellzykluskontrolle und der mitochondrialen Homöostase verknüpft sind. Durch ubiquitinabhängige Umgestaltung transkriptioneller und reparaturbezogener Netzwerke trägt HUWE1 zur Aufrechterhaltung der Genomstabilität und zur zellulären Anpassung an genotoxischen und proteotoxischen Stress bei. Eine dysregulierte HUWE1-Aktivität wurde mit veränderten Entwicklungsprogrammen und onkogenen Phänotypen in Verbindung gebracht, weshalb HUWE1 häufig als zentraler Knotenpunkt der Ubiquitin-Signalgebung und krankheitsrelevanter zellulärer Umbauprozesse untersucht wird.
URE-B1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HUWE1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HUWE1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HUWE1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HUWE1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.