UPIIIa Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423622

Descripción general

Upk3a codifica la uroplaquina IIIa (UPIIIa), un componente similar a una tetraspanina de la membrana apical del urotelio que participa en el ensamblaje de las placas de uroplaquinas y en el mantenimiento de la barrera de permeabilidad del tracto urinario. UPIIIa forma complejos con otras uroplaquinas para apoyar la diferenciación terminal de las células “paraguas” y para regular el tráfico de membrana y la estabilidad mecánica durante el llenado y el vaciado de la vejiga. La alteración de la composición de las uroplaquinas puede comprometer la integridad epitelial, modificar los programas de diferenciación urotelial y promover respuestas inflamatorias vinculadas a disfunciones del tracto urinario. En modelos murinos, Upk3a se utiliza para investigar vías que gobiernan la formación de la barrera epitelial, la remodelación del urotelio y las interacciones huésped–patógeno en la superficie vesical.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO UPIIIa (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Upk3a en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Upk3a junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Upk3a tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína UPIIIa.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Upk3a para la investigación de la señalización de UPIIIa, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Upk3a críticos para la función de UPIIIa
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Upk3a para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido UPIIIa CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido UPIIIa CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Upk3a. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR UPIIIa (m) y el plásmido HDR UPIIIa (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Upk3a para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Upk3a definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.