Plásmido Doble Nickase (h) uPAR: sc-400666-NIC

El gen humano **PLAUR** codifica el receptor del activador del plasminógeno tipo urocinasa (**uPAR**), un receptor de superficie celular anclado a GPI que concentra la actividad de uPA para promover la generación de plasmina y la proteólisis pericelular. Mediante interacciones con la vitronectina y con correceptores como las integrinas y miembros de la familia FPR, uPAR coordina la remodelación de la matriz extracelular, la adhesión celular, la migración y la señalización relacionada con la invasión, vinculando la actividad proteasa con la dinámica del citoesqueleto y con vías asociadas a MAPK/PI3K. La expresión desregulada de PLAUR/uPAR se ha asociado con la remodelación inflamatoria y con la biología del microambiente tumoral, donde la proteólisis alterada y la motilidad celular contribuyen a fenotipos asociados a la enfermedad. Como regulador nodal en la superficie celular, uPAR se estudia con frecuencia en mecanismos de diseminación metastásica, angiogénesis y tráfico de células inmunitarias.

uPAR El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PLAUR en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PLAUR. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PLAUR. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PLAUR alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.