UNC5H1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405369

Übersicht

UNC5A kodiert den Netrin-Rezeptor UNC5H1, ein transmembranäres Leitmolekül, das über ligandenabhängige Signalübertragung die Axonnavigation und die Positionierung von Neuronen steuert. UNC5H1 ist an der durch Netrin‑1 vermittelten Integration attraktiver und repulsiver Leitsignale beteiligt und kann über nachgeschaltete Signalwege der Rho‑Familie von GTPasen sowie MAPK‑gekoppelte Kaskaden die Zytoskelettdynamik, Zelladhäsion und das Migrationsverhalten beeinflussen. Über die Neuroentwicklung hinaus wurde UNC5H1‑assoziierte Signalübertragung mit der Regulation der Apoptose und epithelial‑mesenchymal‑ähnlichen Zellprogrammen in Verbindung gebracht, was Rollen in Gewebemusterung und Homöostase unterstützt. Eine fehlregulierte UNC5A/UNC5H1‑Expression oder eine veränderte Kopplung an Signalwege wurde in Studien zu neuroentwicklungsbedingten Störungen und zur Krebsbiologie beschrieben, wo sie als mechanistischer Knotenpunkt dient, um das Zusammenspiel von Leit- und Überlebenssignalen zu untersuchen.

Das UNC5H1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des UNC5A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des UNC5A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von UNC5A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die UNC5H1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von UNC5A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der UNC5H1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf UNC5A-Exone abzielen, die für die UNC5H1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere UNC5A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom UNC5H1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom UNC5H1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des UNC5A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das UNC5H1 HDR-Plasmid (h) und UNC5H1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von UNC5A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten UNC5A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.