Plasmide CRISPR/Cas9 KO UNC5H1 (h): sc-405369

Présentation

UNC5A code pour le récepteur de la nétrine UNC5H1, une molécule de guidage transmembranaire qui dirige la navigation des axones et le positionnement des neurones via une signalisation dépendante du ligand. UNC5H1 participe à l’intégration des signaux attractifs/répulsifs médiée par la nétrine‑1 et peut influencer la dynamique du cytosquelette, l’adhérence et le comportement migratoire par l’intermédiaire de voies en aval impliquant les GTPases de la famille Rho et des voies liées aux MAPK. Au-delà du neurodéveloppement, la signalisation associée à UNC5H1 a été reliée à la régulation de l’apoptose et à des programmes cellulaires de type transition épithélio‑mésenchymateuse, ce qui soutient des rôles dans la mise en place des tissus et l’homéostasie. Une expression dérégulée d’UNC5A/UNC5H1 ou un couplage altéré des voies a été rapporté dans des études sur les troubles du neurodéveloppement et la biologie du cancer, où ce récepteur est utilisé comme nœud mécanistique pour explorer le dialogue entre guidage et survie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO UNC5H1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène UNC5A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du UNC5A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert UNC5A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine UNC5H1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en UNC5A pour l'étude de la signalisation de UNC5H1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de UNC5A essentiels à la fonction de UNC5H1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de UNC5A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le UNC5H1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le UNC5H1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus UNC5A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le UNC5H1 plasmide HDR (h) et le UNC5H1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie UNC5A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles UNC5A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.