Particules Lentivirales d'Activation (m) UNC45A: sc-430401-LAC

Unc45a code pour UNC45A, une chaperonne de la myosine à domaine UCS qui coopère avec HSP90 pour favoriser le repliement correct, la stabilisation et le cycle fonctionnel des myosines non musculaires. En régulant la dynamique actomyosine, UNC45A soutient l’organisation du cytosquelette, le trafic vésiculaire et la migration cellulaire, et se trouve ainsi impliquée dans des processus tels que la cytocinèse et la polarité épithéliale. Une activité altérée d’UNC45A peut perturber la protéostasie et les voies de signalisation dépendantes de la contractilité, avec des effets en aval sur l’homéostasie tissulaire et les réponses au stress. Ces fonctions font d’UNC45A chez la souris une cible pertinente pour des études mécanistiques des phénotypes associés au cytosquelette et des réseaux géniques qui influencent les comportements prolifératifs et migratoires.

Les particules d'activation lentivirales UNC45A (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Unc45a dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales UNC45A (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Unc45a, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de UNC45A. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Unc45a ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.