Plasmide CRISPR d'Activation (h) Unc18-1: sc-403761-ACT

STXBP1 code pour Unc18-1, une protéine de la famille Sec1/Munc18 qui se lie à la syntaxine‑1 et coordonne l’assemblage du complexe SNARE afin de contrôler l’amarrage et la fusion des vésicules synaptiques déclenchés par le Ca²⁺. En régulant la libération de neurotransmetteurs et le cycle des vésicules présynaptiques, Unc18‑1 soutient l’excitabilité des réseaux neuronaux et la plasticité synaptique. Une perturbation de l’exocytose dépendante de STXBP1 affecte le trafic vésiculaire et les voies de fusion membranaire au cœur de la transmission synaptique. Les variations génétiques et les modifications d’expression de STXBP1 sont associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et épileptiques, ce qui fait de ce locus une cible largement pertinente pour les études mécanistiques des dysfonctionnements neuronaux.

Unc18-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de STXBP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Unc18-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus STXBP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription STXBP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Unc18-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus STXBP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Unc18-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Unc18-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de STXBP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.