ULK2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402558-ACT

ULK2 (UNC-51-like autophagieaktivierende Kinase 2) kodiert eine Serin/Threonin-Kinase, die als zentraler Initiator der Makroautophagie fungiert und in Reaktion auf Nährstoff- und Energiesignale die frühe Autophagosomenbildung koordiniert. ULK2 wirkt innerhalb des ULK-Komplexes und integriert vorgelagerte Signale aus der mTORC1- und AMPK-Signalübertragung, um Phosphorylierungsereignisse zu modulieren, die metabolischen Stress mit dem autophagischen Flux verknüpfen. Über seine Rolle in der Proteostase, der Qualitätskontrolle von Organellen und der zellulären Anpassung an Hungerzustände beeinflusst ULK2 Prozesse wie die mitochondriale Homöostase und Stressresilienz. Eine Fehlregulation ULK2-assoziierter Autophagieprogramme wurde in Zusammenhängen untersucht, die für Neurodegeneration, den Stoffwechsel von Krebszellen und inflammatorische Signalgebung relevant sind.

ULK2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ULK2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ULK2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ULK2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ULK2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ULK2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ULK2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ULK2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ULK2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ULK2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.