Plasmide Double Nickase (h) UKHC: sc-402349-NIC

KIF5B code pour la chaîne lourde de la kinésine‑1 exprimée de manière ubiquitaire (UKHC), un moteur dépendant des microtubules qui assure, grâce à l’ATP, le transport antérograde de cargaisons membranaires, d’organites et de complexes protéiques le long des axones et d’autres types cellulaires polarisés. Par ses interactions avec les chaînes légères de kinésine et des adaptateurs de cargaison, KIF5B coordonne le trafic intracellulaire, contribue à la dynamique du fuseau mitotique et participe au maintien de la polarité cellulaire ainsi qu’à l’organisation du cytosquelette. Ces fonctions recoupent des voies impliquées dans le transport neuronal, la distribution mitochondriale et le trafic vésiculaire au sein des systèmes sécrétoires et endocytaires. Une régulation altérée de KIF5B ou des réarrangements ont été associés à des contextes de signalisation oncogénique et à des phénotypes de trafic perturbé pertinents pour la biologie tumorale et la neurobiologie.

UKHC Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KIF5B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KIF5B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KIF5B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KIF5B.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.