Plasmide Double Nickase (h) UHRF1: sc-403851-NIC

UHRF1 (ubiquitin-like with PHD and RING finger domains 1) est un régulateur épigénétique multidomaine qui coordonne le maintien de la méthylation de l’ADN et l’héritage de l’état de la chromatine pendant la phase S. En reconnaissant les sites CpG hémiméthylés et des marques de l’histone H3, UHRF1 recrute et stimule DNMT1 et s’interface avec les machineries d’ubiquitination et de désacétylation des histones afin de préserver les programmes transcriptionnels. Son activité soutient la progression du cycle cellulaire, l’assemblage de la chromatine couplé à la réplication et la stabilité du génome, via la régulation de l’organisation de l’hétérochromatine et des réponses aux dommages de l’ADN. Une expression dérégulée d’UHRF1 et des profils de méthylation dépendants d’UHRF1 altérés sont fréquemment associés à un silençage aberrant des voies suppresseurs de tumeur et, plus largement, à un remodelage épigénomique dans la biologie des cancers.

UHRF1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus UHRF1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de UHRF1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de UHRF1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de UHRF1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.