Plasmide Double Nickase (m) UGT8: sc-423604-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) UGT8 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide UGT8 Double Nickase (m) et le plasmide UGT8 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Ugt8a. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) UGT8 | sc-423604-NIC | 20 µg | $410.00 |
Ugt8a code l’UDP-galactose:céramide galactosyltransférase (UGT8), une glycosyltransférase résidente de l’appareil de Golgi qui catalyse la formation du galactosylcéramide, un sphingolipide clé enrichi dans les cellules gliales myélinisantes. En contrôlant les niveaux de galactosylcéramide et de glycolipides apparentés, UGT8 influence la composition des microdomaines membranaires, le trafic vésiculaire et la biogenèse de la myéline, en s’inscrivant dans des voies plus larges du métabolisme des sphingolipides et de l’homéostasie lipidique. Chez la souris, une activité UGT8 altérée est pertinente pour l’étude du développement du système nerveux et de l’intégrité de la substance blanche, et elle constitue un point d’entrée moléculaire pour explorer comment un déséquilibre des glycolipides contribue à des phénotypes neuro-inflammatoires et neurodégénératifs dans des modèles expérimentaux.
UGT8 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Ugt8a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Ugt8a. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Ugt8a. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Ugt8a.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.