Plasmide CRISPR/Cas9 KO UGT2B4 (h): sc-404208

Présentation

UGT2B4 code une UDP‑glucuronosyltransférase humaine qui catalyse la glucuronidation de stéroïdes endogènes et de métabolites liés aux acides biliaires, ainsi que de divers xénobiotiques, en augmentant leur solubilité afin de faciliter leur élimination. Cette activité de conjugaison de phase II s’intègre aux réseaux de détoxification hépatiques et intestinaux et interagit avec des voies régulées par des récepteurs nucléaires, qui coordonnent l’homéostasie métabolique et les réponses au stress chimique. Des variations de l’expression ou de l’activité d’UGT2B4 peuvent modifier la prise en charge des stéroïdes et des acides biliaires et altérer la clairance de substrats de petite taille, ce qui influence les relations exposition–réponse en pharmacologie. En conséquence, UGT2B4 est étudiée dans le contexte de phénotypes associés au métabolisme et de différences tissulaires de capacité de biotransformation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO UGT2B4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène UGT2B4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du UGT2B4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert UGT2B4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine UGT2B4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en UGT2B4 pour l'étude de la signalisation de UGT2B4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de UGT2B4 essentiels à la fonction de UGT2B4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de UGT2B4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le UGT2B4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le UGT2B4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus UGT2B4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le UGT2B4 plasmide HDR (h) et le UGT2B4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie UGT2B4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles UGT2B4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.