Plasmide CRISPR/Cas9 KO UGT2B15 (h): sc-405610

Présentation

UGT2B15 code une UDP‑glucuronosyltransférase humaine qui catalyse la glucuronidation de phase II d’hormones endogènes et de divers xénobiotiques, augmentant leur solubilité afin de faciliter leur élimination. En tant qu’enzyme de la membrane du réticulum endoplasmique appartenant à la famille UGT2, elle contribue à la clairance métabolique hépatique et extra‑hépatique et module l’exposition intracellulaire aux stéroïdes bioactifs via une inactivation dépendante de la conjugaison. Des variations de l’activité d’UGT2B15 peuvent déplacer l’homéostasie des androgènes et d’autres stéroïdes, influençant les réseaux de signalisation endocrinienne et les programmes transcriptionnels en aval. Une expression modifiée ou des polymorphismes ont été étudiés dans le contexte des cancers hormono‑dépendants ainsi que des différences interindividuelles du métabolisme des médicaments et des phénotypes de toxicité.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO UGT2B15 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène UGT2B15 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du UGT2B15, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert UGT2B15 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine UGT2B15.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en UGT2B15 pour l'étude de la signalisation de UGT2B15, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de UGT2B15 essentiels à la fonction de UGT2B15
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de UGT2B15 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le UGT2B15 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le UGT2B15 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus UGT2B15. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le UGT2B15 plasmide HDR (h) et le UGT2B15 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie UGT2B15 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles UGT2B15 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.