Plasmide CRISPR d'Activation (h) UGCG: sc-403055-ACT

UGCG humain code l’UDP‑glucose céramide glucosyltransférase, une glycosyltransférase localisée dans l’appareil de Golgi qui catalyse la première étape engagée de la biosynthèse des glycosphingolipides en convertissant le céramide en glucosylcéramide. Cette réaction régule l’équilibre cellulaire du céramide et soutient la production en aval de glycosphingolipides complexes, lesquels influencent l’organisation des microdomaines membranaires, la signalisation des récepteurs, le trafic vésiculaire et les interactions cellule–cellule. L’activité d’UGCG s’inscrit à l’interface du métabolisme des sphingolipides et des voies de réponse au stress, modulant des processus tels que la différenciation, la sensibilité à l’apoptose et la signalisation inflammatoire. Une homéostasie des glycosphingolipides dérégulée impliquant UGCG a été associée à des phénotypes neurodégénératifs et métaboliques, et a été étudiée en oncologie, où une signalisation lipidique altérée peut moduler la prolifération et la réponse aux médicaments.

UGCG Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de UGCG sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

UGCG Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus UGCG dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription UGCG, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de UGCG. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus UGCG natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de UGCG au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie UGCG dans les cellules tumorales présentant une expression de UGCG silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.