Plasmide CRISPR/Cas9 KO UDP-GlcDH (m): sc-423601

Présentation

Le gène murin **Ugdh** code l’UDP‑glucose 6‑déshydrogénase (UDP‑GlcDH), une enzyme cytosolique qui oxyde l’UDP‑glucose en acide UDP‑glucuronique, un précurseur clé de la biosynthèse des glycosaminoglycanes et des protéoglycanes. Cette réaction soutient l’assemblage et le remodelage de la matrice extracellulaire en fournissant des substrats pour la production d’hyaluronane et de sulfate de chondroïtine/dermatane, influençant l’adhérence cellulaire, la migration et la morphogenèse tissulaire. L’activité d’Ugdh relie également le métabolisme des glucides aux voies d’interconversion des UDP‑sucres qui déterminent la composition du glycocalyx et la signalisation intercellulaire. Dans des modèles expérimentaux, une disponibilité dérégulée de l’acide UDP‑glucuronique et une glycosylation altérée de la matrice ont été associées à des programmes développementaux modifiés, à des changements matriciels de type fibrotique et à des phénotypes d’invasion liés au cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO UDP-GlcDH (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ugdh dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ugdh, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ugdh à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine UDP-GlcDH.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ugdh pour l'étude de la signalisation de UDP-GlcDH, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ugdh essentiels à la fonction de UDP-GlcDH
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ugdh pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le UDP-GlcDH plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le UDP-GlcDH plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ugdh. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le UDP-GlcDH plasmide HDR (m) et le UDP-GlcDH (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ugdh pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ugdh définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.