UCP3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400866-ACT

Humanes UCP3 (Uncoupling-Protein 3) ist ein Carrier in der inneren Mitochondrienmembran, der den Protonenleckstrom moduliert und die Kopplungseffizienz der oxidativen Phosphorylierung beeinflusst. Dadurch prägt es die ATP-Produktion, das Gleichgewicht reaktiver Sauerstoffspezies und die Wärmebildung in metabolisch aktiven Geweben. UCP3 ist eng mit der Fettsäureoxidation und der mitochondrialen Qualitätskontrolle verknüpft und spielt eine Rolle bei der Regulation der Substratnutzung unter Nährstoffstress und bei hohem Lipidfluss. Eine veränderte UCP3-Expression wurde mit Insulinresistenz, adipositasassoziierter Stoffwechselstörung und mitochondrialen Phänotypen in der Skelettmuskulatur in Verbindung gebracht, was seine Eignung als Knotenpunkt für die Untersuchung der Energiehomöostase unterstreicht. UCP3 ist daher relevant für Signalwege, die mitochondriale Atmung, Lipidverarbeitung und Redoxsignalgebung im zellulären und organismischen Stoffwechsel integrieren.

UCP3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen UCP3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

UCP3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des UCP3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der UCP3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen UCP3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native UCP3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von UCP3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des UCP3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem UCP3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.