Plasmide CRISPR d'Activation (h) UCP3: sc-400866-ACT

L’UCP3 humain (protéine découplante 3) est un transporteur de la membrane interne mitochondriale qui module la fuite de protons et influence l’efficacité du couplage de la phosphorylation oxydative, façonnant la production d’ATP, l’équilibre des espèces réactives de l’oxygène et la génération de chaleur dans les tissus à forte activité métabolique. Elle est étroitement liée à l’oxydation des acides gras et au contrôle qualité mitochondrial, avec des rôles dans la régulation de l’utilisation des substrats en situation de stress nutritionnel et de flux lipidiques élevés. Une expression altérée d’UCP3 a été associée à l’insulinorésistance, à des dysfonctionnements métaboliques liés à l’obésité et à des phénotypes mitochondriaux du muscle squelettique, ce qui en fait un nœud pertinent pour l’étude de l’homéostasie énergétique. UCP3 est donc impliquée dans des voies intégrant la respiration mitochondriale, la gestion des lipides et la signalisation redox au sein du métabolisme cellulaire et de l’organisme.

UCP3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de UCP3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

UCP3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus UCP3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription UCP3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de UCP3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus UCP3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de UCP3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie UCP3 dans les cellules tumorales présentant une expression de UCP3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.