Plasmide Double Nickase (h) UCH-L5: sc-416520-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) UCH-L5 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide UCH-L5 Double Nickase (h) et le plasmide UCH-L5 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant UCHL5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: UCH-L5 Antibody (C-4): sc-271002
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) UCH-L5 | sc-416520-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) UCH-L5 | sc-416520-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’UCHL5 humain (UCH-L5/UCH37) est une enzyme déubiquitinante qui retire l’ubiquitine de substrats protéiques afin de réguler la protéostasie et la signalisation dépendante de l’ubiquitine. Elle s’associe à la particule régulatrice 19S du protéasome et peut aussi agir dans le contexte du remodelage de la chromatine INO80, reliant ainsi la déubiquitination au renouvellement des protéines et au contrôle transcriptionnel. En modulant l’édition des chaînes d’ubiquitine et le traitement des substrats, UCH-L5 influence la progression du cycle cellulaire, les réponses au stress et les voies impliquées dans la stabilité du génome. Une activité dérégulée du système ubiquitine–protéasome impliquant UCHL5 a été étudiée dans le cadre de la biologie des cancers et des défauts de protéostasie associés aux maladies neurodégénératives.
UCH-L5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus UCHL5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de UCHL5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de UCHL5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de UCHL5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.