Particules Lentivirales d'Activation (h2) UCH-L1: sc-401088-LAC-2

Chez l’humain, UCHL1 code l’enzyme déubiquitinante UCH-L1, une hydrolase neuronale du C-terminal de l’ubiquitine enrichie dans les neurones, qui maintient l’homéostasie de l’ubiquitine en traitant les précurseurs de l’ubiquitine et les substrats ubiquitinés au sein du système ubiquitine–protéasome. L’activité d’UCH-L1 contribue au contrôle qualité des protéines, à la fonction synaptique et à l’intégrité axonale, ce qui la relie à des voies régissant la protéostasie, les réponses au stress et la survie neuronale. Une dérégulation ou des mutations d’UCHL1 ont été associées à des phénotypes neurodégénératifs et neurodéveloppementaux, notamment à des anomalies liées aux maladies de Parkinson et d’Alzheimer ainsi qu’à des neuropathies périphériques. L’édition génomique d’UCHL1 permet des études mécanistiques de la signalisation de l’ubiquitine, la modélisation de variants pertinents pour la maladie dans des systèmes cellulaires humains et l’évaluation de l’impact d’une déubiquitination altérée sur l’agrégation, le stress mitochondrial et la différenciation neuronale.

Les particules d'activation lentivirales UCH-L1 (h2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de UCHL1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales UCH-L1 (h2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription UCHL1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de UCH-L1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif UCHL1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.