Plasmide CRISPR/Cas9 KO Ubiquitin (h): sc-400526

Présentation

L’UBB humain code l’ubiquitine, une protéine de 76 acides aminés hautement conservée, qui est attachée de manière covalente à des substrats afin de réguler le devenir des protéines et la signalisation. L’ubiquitination contrôle la dégradation par le protéasome ainsi que des voies de signalisation non protéolytiques via des chaînes liées en K48 et en K63, modulant des processus tels que le contrôle qualité des protéines, les réponses aux dommages de l’ADN, la progression du cycle cellulaire, l’endocytose et la signalisation immunitaire innée. L’homéostasie de l’ubiquitine et la protéostasie dépendante de l’ubiquitine sont étroitement liées aux réponses cellulaires au stress, et leur dérégulation est fréquemment impliquée dans les maladies neurodégénératives, la biologie des cancers et des phénotypes inflammatoires. Comme UBB contribue au pool cellulaire d’ubiquitine, une perturbation de son expression peut influencer la disponibilité globale de l’ubiquitine et, en aval, la dynamique du système ubiquitine–protéasome.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Ubiquitin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène UBB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du UBB, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert UBB à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Ubiquitin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en UBB pour l'étude de la signalisation de Ubiquitin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de UBB essentiels à la fonction de Ubiquitin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de UBB pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Ubiquitin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Ubiquitin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus UBB. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Ubiquitin plasmide HDR (h) et le Ubiquitin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie UBB pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles UBB définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.