Plasmide Double Nickase (m) UBE2J1: sc-425050-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) UBE2J1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide UBE2J1 Double Nickase (m) et le plasmide UBE2J1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Ube2j1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: UBE2J1 Antibody (B-6): sc-377002
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) UBE2J1 | sc-425050-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Ube2j1** code **UBE2J1**, une enzyme E2 de conjugaison de l’ubiquitine ancrée à la membrane du réticulum endoplasmique (RE), qui collabore avec des ligases E3 résidentes du RE pour assurer la dégradation associée au RE (ERAD) des protéines mal conformées ou en excès. En fournissant l’ubiquitine aux substrats rétrotransloqués depuis le réticulum endoplasmique, UBE2J1 contribue au maintien de la protéostasie et soutient des voies de signalisation adaptatives lors du stress du RE, notamment via un dialogue avec les voies de la réponse aux protéines mal repliées (UPR). La perturbation des composants de l’ERAD peut modifier l’homéostasie de la voie sécrétoire, la signalisation inflammatoire et la sensibilité au stress protéotoxique, faisant d’UBE2J1 un nœud pertinent pour étudier des mécanismes contribuant à la neurodégénérescence, aux dysfonctionnements métaboliques et au remodelage de la protéostasie associé au cancer. Son activité est également pertinente pour l’étude du contrôle qualité des protéines membranaires et du traitement antigénique liés à un renouvellement dépendant de l’ubiquitine.
UBE2J1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Ube2j1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Ube2j1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Ube2j1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Ube2j1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.