Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (m) UBC13: sc-430050-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) UBC13 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide UBC13 Double Nickase (m) et le plasmide UBC13 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Ube2n. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: UBC13 Antibody (F-10): sc-376470
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) UBC13 | sc-430050-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) UBC13 | sc-430050-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Ube2n code l’enzyme E2 de conjugaison de l’ubiquitine UBC13, qui catalyse la formation de chaînes de polyubiquitine liées en K63 en partenariat avec des cofacteurs UEV tels que UBE2V1/UBE2V2. Ce signal d’ubiquitination non dégradatif favorise l’assemblage de complexes de réponse aux dommages de l’ADN et régule la signalisation de l’immunité innée via les protéines TRAF, contribuant à l’activation des voies NF-κB et MAPK. Dans les systèmes murins, des échafaudages d’ubiquitine dépendants d’UBC13 influencent la stabilité du génome, le niveau basal de signalisation inflammatoire et les réponses cellulaires au stress au sein des lignées hématopoïétiques et stromales. La dérégulation de ces processus est pertinente pour les études portant sur le dysfonctionnement immunitaire, les phénotypes inflammatoires aberrants et la susceptibilité aux pathologies associées à l’instabilité génomique.
UBC13 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Ube2n dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Ube2n. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Ube2n. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Ube2n.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.