Plasmide CRISPR/Cas9 KO UBC (m): sc-418924

Présentation

Le gène murin **Ubc** code la polyubiquitine C (UBC), une source majeure de monomères d’ubiquitine nécessaires au renouvellement des protéines dépendant de l’ATP par le système ubiquitine–protéasome. UBC soutient la régulation de la progression du cycle cellulaire, des réponses aux dommages de l’ADN, de l’adaptation au stress et de la signalisation inflammatoire, en contrôlant la stabilité et l’activité de composants clés de ces voies. Comme l’homéostasie de l’ubiquitine amortit le stress protéotoxique et module la sortie des signaux, les altérations de l’apport en ubiquitine et les déséquilibres de protéostase sont fréquemment étudiés dans des modèles de neurodégénérescence, de contrôle de la croissance lié au cancer et de dérégulation immunitaire. **Ubc** est donc couramment utilisé pour explorer le contrôle qualité dépendant du protéasome, la dynamique des chaînes d’ubiquitine et les interactions avec l’autophagie et les voies de réponse au stress dans les cellules murines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO UBC (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ubc dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ubc, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ubc à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine UBC.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ubc pour l'étude de la signalisation de UBC, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ubc essentiels à la fonction de UBC
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ubc pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le UBC plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le UBC plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ubc. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le UBC plasmide HDR (m) et le UBC (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ubc pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ubc définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.