Plasmide Double Nickase (m) U2AF65: sc-423572-NIC

U2af2 code pour la protéine murine U2AF65, un facteur d’épissage essentiel se liant à l’ARN, qui reconnaît la piste polypyrimidique aux sites d’épissage 3′ et contribue au recrutement de l’U2 snRNP lors des étapes précoces de l’assemblage du spliceosome. Grâce à ses motifs de reconnaissance de l’ARN et à ses interactions avec U2AF35 et SF1, U2AF65 coordonne la définition des exons et les choix d’épissage alternatif qui déterminent la production d’isoformes de transcrits dans de nombreuses voies de signalisation et du cycle cellulaire. La perturbation de l’épissage dépendant d’U2AF65 peut modifier la maturation des ARNm, leur export nucléaire et la composition du protéome, faisant d’U2af2 un nœud clé pour l’étude de la fidélité des processus de maturation de l’ARN. Des programmes d’épissage dérégulés et un déséquilibre des facteurs du spliceosome sont largement impliqués dans la biologie des tumeurs hématologiques et solides, ainsi que dans les mécanismes de maladies du neurodéveloppement et de la neurodégénérescence, ce qui soutient l’utilisation de modèles U2af2 pour explorer des réseaux d’épissage pertinents pour la maladie.

U2AF65 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus U2af2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de U2af2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de U2af2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de U2af2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.