U2AF65 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402059-ACT

ヒトU2AF2はU2AF65をコードしており、U2補助スプライシング因子の必須構成要素として、3′スプライス部位のポリピリミジントラクトを認識し、pre-mRNAスプライシング時のU2 snRNPのリクルートを促進します。U2AF65はRNA認識モチーフおよびスプライシングパートナーとの相互作用を介して、エクソン–イントロン境界の規定を助け、スプライソソームのアセンブリを協調的に制御することで、選択的スプライシングプログラムとトランスクリプトームの恒常性に影響を与えます。U2AF2依存的スプライシングは遺伝子発現制御と密接に連動しており、細胞周期制御、DNA損傷応答、RNA代謝に関与する経路を調節し得ます。U2AF2の発現異常やスプライシング因子ネットワークの不均衡は、複数のがんおよび血液疾患の文脈で観察される異常なアイソフォーム利用と関連しており、スプライシング駆動性表現型の機序研究における重要な標的となっています。

U2AF65 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性U2AF2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

U2AF65 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における U2AF2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はU2AF2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性U2AF65の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のU2AF2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるU2AF65依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびU2AF2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるU2AF65経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。