Plásmido Doble Nickase (h) Type I 5-phosphatase: sc-410836-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Type I 5-phosphatase consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Type I 5-phosphatase (h) y el plásmido de doble nickasa Type I 5-phosphatase (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a INPP5A. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Type I 5-phosphatase | sc-410836-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Type I 5-phosphatase | sc-410836-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
INPP5A codifica la 5‑fosfatasa tipo I de polifosfatos de inositol, una enzima citosólica que hidroliza el fosfato en posición 5 del inositol 1,4,5‑trifosfato (IP3) y de fosfatos de inositol relacionados para terminar la señalización de segundos mensajeros. Al limitar la movilización de calcio dependiente de IP3 desde el retículo endoplásmico, INPP5A modula procesos regulados por Ca2+ que incluyen la secreción, la excitabilidad y las respuestas transcripcionales dependientes de la actividad. Este recambio de fosfoinosítidos/fosfatos de inositol se cruza con la señalización vinculada a PI3K y con un control homeostático más amplio de las respuestas celulares al estrés. Las alteraciones en la expresión o la función de INPP5A se han implicado en una señalización del calcio desregulada y se estudian en el contexto de la neurobiología y de la reprogramación de la señalización asociada al cáncer.
Type I 5-phosphatase El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus INPP5A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de INPP5A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de INPP5A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con INPP5A alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.