Plásmido Doble Nickase (h) TWIK-2: sc-407263-NIC

El KCNK6 humano codifica TWIK-2, un canal de potasio de dos dominios de poro (K2P) que contribuye a la conductancia basal de K+ y ayuda a establecer el potencial de membrana en reposo y la excitabilidad de la membrana. Al modular la homeostasis iónica, TWIK-2 influye en el acoplamiento estímulo–secreción, la regulación del volumen celular y los procesos de señalización dependientes de Ca2+ en células excitables y no excitables. La actividad alterada de los canales K2P se ha vinculado con una regulación anómala del tono vascular, la señalización inflamatoria y fenotipos relacionados con la proliferación, lo que convierte a KCNK6 en una diana relevante para estudios mecanísticos sobre la contribución de los canales iónicos a vías cardiometabólicas y asociadas al sistema inmunitario. La función de TWIK-2 se investiga comúnmente en el contexto de lecturas electrofisiológicas, la dinámica de la señalización intracelular y análisis de perturbación a nivel de vías.

TWIK-2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus KCNK6 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de KCNK6. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de KCNK6. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con KCNK6 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.