Particules Lentivirales d'Activation (h) TUSC3: sc-405571-LAC

TUSC3 (tumor suppressor candidate 3) code une sous-unité du complexe d’oligosaccharyltransférase (OST) localisée dans le réticulum endoplasmique, qui participe à la glycosylation N‑liée et au contrôle qualité du repliement des protéines. Par son rôle dans le transfert co‑traductionnel des glycannes, TUSC3 influence la protéostasie, les réponses au stress du RE et la maturation des protéines membranaires et sécrétées, lesquelles alimentent des voies de signalisation et d’adhérence. Une expression ou une fonction altérée de TUSC3 a été associée à une perturbation de l’homéostasie des glycoprotéines et a été étudiée dans des contextes incluant la biologie du cancer et des phénotypes neurodéveloppementaux tels que la déficience intellectuelle. Ces caractéristiques font de TUSC3 un nœud pertinent pour explorer, dans les cellules humaines, les processus associés au RE, la signalisation dépendante des glycoprotéines et les mécanismes d’adaptation au stress.

Les particules d'activation lentivirales TUSC3 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TUSC3 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TUSC3 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TUSC3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TUSC3. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TUSC3 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.