Plasmide Double Nickase (h) TUSC3: sc-405571-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) TUSC3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide TUSC3 Double Nickase (h) et le plasmide TUSC3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TUSC3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TUSC3 Antibody (D-9): sc-390566
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) TUSC3 | sc-405571-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) TUSC3 | sc-405571-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TUSC3 (tumor suppressor candidate 3) code une protéine membranaire du réticulum endoplasmique qui agit comme sous-unité du complexe oligosaccharyltransférase (OST), en soutenant la glycosylation N-liée et le contrôle qualité des protéines. En influençant le repliement des glycoprotéines et l’homéostasie du RE, TUSC3 contribue à des voies de protéostasie qui s’articulent avec la signalisation du stress du RE et des programmes de différenciation cellulaire. Une expression altérée de TUSC3 ou une perte de fonction a été associée à une glycosylation dérégulée et a été rapportée dans des études portant sur des phénotypes neurodéveloppementaux et sur la biologie du cancer, ce qui en fait une cible pertinente pour la recherche mécanistique. Dans les cellules humaines, la perturbation de TUSC3 est couramment utilisée pour explorer comment la glycosylation associée au RE influe sur la maturation des récepteurs, le fonctionnement de la voie sécrétoire et les réponses adaptatives au stress.
TUSC3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TUSC3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TUSC3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TUSC3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TUSC3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.