Plasmide CRISPR/Cas9 KO TUSC2 (h): sc-407062

Présentation

TUSC2 (tumor suppressor candidate 2), également connu sous le nom de FUS1, code une petite protéine associée aux mitochondries, impliquée dans la régulation de l’homéostasie cellulaire, notamment le contrôle des espèces réactives de l’oxygène, la signalisation calcique et l’apoptose induite par le stress. TUSC2 a été associé à la modulation de voies dépendantes de kinases telles que les voies PI3K/AKT et MAPK, influençant les programmes de prolifération et de survie des cellules épithéliales. Une diminution de l’expression ou une perte fonctionnelle de TUSC2 est fréquemment observée dans de nombreux types tumoraux et s’accompagne d’une altération de la fonction mitochondriale et d’un dérèglement du contrôle de la croissance. Ces propriétés font de TUSC2 une cible utile pour disséquer la signalisation mitochondrie-noyau, les réponses au stress oxydant et les dépendances de voies pertinentes pour la biologie du cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TUSC2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TUSC2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TUSC2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TUSC2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TUSC2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TUSC2 pour l'étude de la signalisation de TUSC2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TUSC2 essentiels à la fonction de TUSC2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TUSC2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TUSC2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TUSC2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TUSC2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TUSC2 plasmide HDR (h) et le TUSC2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TUSC2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TUSC2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.