Plasmide Double Nickase (m2) TudorSN: sc-425184-NIC-2

Chez la souris, le gène Snd1 code TudorSN (staphylococcal nuclease and tudor domain containing 1), une protéine multifonctionnelle liant l’ARN qui intègre le traitement de l’ARN aux programmes de régulation génique en participant au complexe de silençage induit par l’ARN, à la répression médiée par les microARN et à des événements associés au spliceosome. TudorSN contribue au contrôle de la stabilité des ARNm et de leur traduction, et a été impliquée dans la co‑régulation transcriptionnelle, la dynamique des granules de stress et des voies de signalisation lipidiques et métaboliques dans divers types cellulaires. Une activité dérégulée de Snd1/TudorSN est associée à des états prolifératifs et inflammatoires altérés et est fréquemment étudiée dans le contexte de la signalisation oncogénique, de la régulation immunitaire et de la neurobiologie. La perturbation génétique de Snd1 dans des modèles murins permet des études mécanistiques de la régulation post‑transcriptionnelle, des voies des petits ARN et des réseaux d’interactions ARN–protéines, au moyen d’outils d’édition basés sur CRISPR, de la génomique fonctionnelle et d’essais centrés sur des voies spécifiques.

TudorSN Le plasmide double nickase (m2) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Snd1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Snd1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Snd1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Snd1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.