Plasmide CRISPR/Cas9 KO TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 (h): sc-400458

Présentation

NKX2-1 (TTF-1, « thyroid transcription factor 1 ») code un facteur de transcription à homéoboîte se liant à l’ADN, qui établit et maintient des programmes de lignée dans la thyroïde en développement et adulte, l’épithélium pulmonaire et le prosencéphale ventral. Il régule des réseaux de gènes contrôlant la différenciation épithéliale, l’homéostasie du surfactant et la morphogenèse des organes, en coordonnant des états transcriptionnels qui s’articulent avec des voies de signalisation du développement telles que Wnt, BMP et FGF. En biologie des maladies humaines, une altération du dosage de NKX2-1 ou des mutations de ce gène sont associées à des phénotypes congénitaux cerveau–poumon–thyroïde et contribuent, selon le contexte, à un remaniement transcriptionnel dans les pathologies pulmonaires et thyroïdiennes. Parce que NKX2-1 agit comme un régulateur maître de l’identité cellulaire, il est fréquemment étudié dans des modèles de différenciation, des transitions d’état épithélial et des mécanismes de dépendance oncogénique à une lignée.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NKX2-1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NKX2-1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NKX2-1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NKX2-1 pour l'étude de la signalisation de TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NKX2-1 essentiels à la fonction de TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NKX2-1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NKX2-1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 plasmide HDR (h) et le TTF-1/Thyroid Transcription Factor 1/NKX2-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NKX2-1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NKX2-1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.