TTC36 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-414529-ACT

Il gene umano **TTC36** codifica una proteina contenente ripetizioni tetratricopeptidiche (TPR), prevista come impalcatura di interazione proteina–proteina in grado di modulare l’assemblaggio o la stabilità di complessi multiproteici. Le proteine TPR influenzano comunemente la segnalazione intracellulare, il traffico proteico e le vie di controllo qualità coordinando le interazioni con gli chaperoni e la localizzazione subcellulare. Sebbene **TTC36** rimanga relativamente poco studiato, il suo profilo di espressione e le potenziali reti di interazione lo rendono rilevante per indagare la regolazione, dipendente dal contesto, dei programmi trascrizionali e della proteostasi nelle cellule umane. Alterazioni dell’attività dei processi di impalcatura associati alle TPR sono state collegati in senso ampio a una deregolazione del controllo della crescita e delle risposte allo stress, sostenendo **TTC36** come bersaglio utile per ricerche esplorative sui meccanismi di malattia.

TTC36 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TTC36 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TTC36 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TTC36 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TTC36, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TTC36. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TTC36 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TTC36 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TTC36 nelle cellule tumorali con espressione di TTC36 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.