Plasmide CRISPR/Cas9 KO TSSC3 (m): sc-423530

Présentation

Phlda2 code la protéine « pleckstrin homology-like domain family A member 2 », également connue sous le nom de TSSC3, un facteur soumis à empreinte génomique et régulateur de la croissance, impliqué chez la souris dans le contrôle du développement placentaire et de la croissance fœtale. TSSC3 est associée à des processus de signalisation qui influencent la prolifération et la survie cellulaires, notamment des voies intégrant des signaux dépendants des phosphoinositides et une régulation de l’expression génique sensible au stress. Une altération du dosage ou une empreinte dérégulée au locus Phlda2 a été associée à des phénotypes développementaux et présente un intérêt pour l’étude du contrôle de la croissance ainsi que de fonctions de type suppresseur de tumeur dans certains contextes cellulaires. En tant que gène exprimé à partir de l’allèle maternel, Phlda2 constitue aussi un modèle utile pour étudier les effets liés à l’origine parentale, la régulation épigénétique et des réseaux transcriptionnels sensibles au dosage.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TSSC3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Phlda2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Phlda2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Phlda2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TSSC3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Phlda2 pour l'étude de la signalisation de TSSC3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Phlda2 essentiels à la fonction de TSSC3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Phlda2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TSSC3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TSSC3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Phlda2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TSSC3 plasmide HDR (m) et le TSSC3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Phlda2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Phlda2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.