Plasmide CRISPR/Cas9 KO TSPYL1 (m): sc-423529

Présentation

Tspyl1 code pour la protéine TSPYL1, un membre de la famille des protéines d’assemblage des nucléosomes (NAP) impliqué dans l’organisation de la chromatine et la régulation transcriptionnelle. Dans les cellules murines, TSPYL1 a été associée au contrôle de la progression du cycle cellulaire et de la différenciation via une modulation épigénétique des programmes d’expression génique, influençant des processus tels que la transcription dépendante de l’ADN et l’accessibilité de la chromatine. En façonnant les états de la chromatine, TSPYL1 peut affecter des voies qui régissent la prolifération et les réponses au stress cellulaire, ce qui la rend pertinente pour l’étude des phénotypes du développement et des mécanismes de transformation oncogénique. La dérégulation des protéines de la famille TSPYL a été associée à des altérations du contrôle de la croissance et à des signatures transcriptionnelles liées à des maladies, ce qui étaye son utilisation comme cible en génomique fonctionnelle.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TSPYL1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tspyl1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tspyl1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tspyl1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TSPYL1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tspyl1 pour l'étude de la signalisation de TSPYL1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tspyl1 essentiels à la fonction de TSPYL1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tspyl1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TSPYL1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TSPYL1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tspyl1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TSPYL1 plasmide HDR (m) et le TSPYL1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tspyl1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tspyl1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.