Plasmide CRISPR/Cas9 KO TSPAN7 (m): sc-423425

Présentation

Tspan7 code pour la protéine tétraspanine TSPAN7, un échafaudage membranaire multipasse qui organise des microdomaines enrichis en tétraspanines et module la distribution ainsi que la signalisation des récepteurs partenaires à la surface cellulaire. Chez la souris, TSPAN7 est impliquée dans le trafic membranaire, le remodelage du cytosquelette et des processus de communication cellule–cellule qui influencent le développement neuronal et l’organisation synaptique, et elle peut également affecter des programmes d’adhérence et de motilité dans d’autres types cellulaires. Par des interactions qui façonnent le regroupement des récepteurs et la signalisation en aval, TSPAN7 contribue à des voies liées à l’endocytose, à la dynamique de l’actine et à la transduction du signal au sein de compartiments membranaires spécialisés. Un dysfonctionnement des réseaux de tétraspanines a été associé à des phénotypes neurodéveloppementaux et à une connectivité cellulaire altérée, ce qui fait de Tspan7 un locus utile pour des études mécanistiques de la biologie des microdomaines membranaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TSPAN7 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tspan7 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tspan7, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tspan7 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TSPAN7.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tspan7 pour l'étude de la signalisation de TSPAN7, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tspan7 essentiels à la fonction de TSPAN7
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tspan7 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TSPAN7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TSPAN7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tspan7. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TSPAN7 plasmide HDR (m) et le TSPAN7 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tspan7 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tspan7 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.