Plasmide CRISPR d'Activation (h) TSPAN7: sc-404065-ACT

La tétraspanine 7 (TSPAN7) est une protéine transmembranaire à quatre passages jouant un rôle d’échafaudage : elle organise des microdomaines enrichis en tétraspanines et coordonne l’assemblage latéral, à la surface cellulaire, de récepteurs, d’intégrines et d’adaptateurs de signalisation. Dans les cellules humaines, TSPAN7 influence le trafic membranaire, la dynamique du cytosquelette d’actine et des processus de communication cellule–cellule qui façonnent les programmes d’adhésion et de motilité, avec des rôles notables dans le développement neuronal et l’organisation synaptique. Via ces plateformes associées à la membrane, TSPAN7 peut moduler la distribution des récepteurs et les cascades de signalisation en aval liées à l’endocytose et au remodelage du cytosquelette. Une expression ou une fonction altérée de TSPAN7 a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et a été étudiée dans des contextes où l’organisation membranaire et la compétence de signalisation contribuent à des états cellulaires pertinents pour la maladie.

TSPAN7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TSPAN7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TSPAN7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TSPAN7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TSPAN7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TSPAN7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TSPAN7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TSPAN7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TSPAN7 dans les cellules tumorales présentant une expression de TSPAN7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.