Plásmido CRISPR de Activación (h) TSPAN7: sc-404065-ACT

La tetraspanina 7 (TSPAN7) es una proteína de andamiaje transmembrana de cuatro pasos que organiza microdominios enriquecidos en tetraspaninas y coordina el ensamblaje lateral de receptores de la superficie celular, integrinas y adaptadores de señalización. En células humanas, TSPAN7 influye en el tráfico de membrana, la dinámica del citoesqueleto de actina y los procesos de comunicación célula–célula que moldean los programas de adhesión y motilidad, con funciones destacadas en el desarrollo neuronal y la organización sináptica. A través de estas plataformas asociadas a la membrana, TSPAN7 puede modular la distribución de receptores y las cascadas de señalización aguas abajo vinculadas a la endocitosis y a la remodelación del citoesqueleto. La alteración de la expresión o la función de TSPAN7 se ha asociado con fenotipos del neurodesarrollo y se ha investigado en contextos en los que la organización de membrana y la competencia de señalización contribuyen a estados celulares relevantes para enfermedades.

TSPAN7 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TSPAN7 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TSPAN7 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TSPAN7 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TSPAN7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TSPAN7. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TSPAN7 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TSPAN7 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TSPAN7 en células tumorales con expresión de TSPAN7 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.