Plasmide CRISPR/Cas9 KO TSPAN18 (h): sc-405937

Présentation

TSPAN18 code une protéine membranaire de la famille des tétraspanines qui contribue à organiser des microdomaines enrichis en tétraspanines, en coordonnant les interactions latérales entre récepteurs, molécules d’adhérence et adaptateurs de signalisation au niveau de la membrane plasmique. Grâce à ces fonctions d’échafaudage, TSPAN18 peut influencer des processus tels que la communication cellule–cellule, le trafic membranaire et l’intégration des signaux, qui façonnent les programmes d’activation cellulaire et de motilité. L’expression et les variations génétiques des tétraspanines, dont TSPAN18, ont été associées dans la littérature à des phénotypes liés aux plaquettes et à la biologie vasculaire, ce qui étaye l’intérêt de cette cible dans l’étude de la signalisation associée à l’hémostase et des réponses inflammatoires. L’analyse de la fonction de TSPAN18 peut éclairer la manière dont la composition des microdomaines membranaires module des voies en aval pertinentes pour les mécanismes des maladies cardiovasculaires et immuno-associées.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TSPAN18 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TSPAN18 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TSPAN18, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TSPAN18 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TSPAN18.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TSPAN18 pour l'étude de la signalisation de TSPAN18, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TSPAN18 essentiels à la fonction de TSPAN18
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TSPAN18 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TSPAN18 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TSPAN18 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TSPAN18. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TSPAN18 plasmide HDR (h) et le TSPAN18 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TSPAN18 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TSPAN18 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.