TSHZ3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-410072-ACT

TSHZ3 (teashirt zinc finger homeobox 3) codifica um fator de transcrição nuclear caracterizado por domínios “zinc finger” C2H2 que regulam programas de expressão gênica durante o desenvolvimento e a especificação de tipos celulares. Em tecidos humanos, o TSHZ3 contribui para o controle transcricional de processos de diferenciação e de padronização, integrando-se a redes regulatórias gênicas mais amplas que moldam a identidade de linhagens e a organogênese. A desregulação da expressão ou da função de TSHZ3 tem sido associada a fenótipos do neurodesenvolvimento e a alterações na formação de circuitos, o que o torna relevante para estudos de controle transcricional em linhagens neuronais e mesenquimais. Como regulador de ligação ao DNA, o TSHZ3 é comumente investigado em vias que influenciam a morfogênese, o desenvolvimento sináptico e decisões de destino celular.

TSHZ3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TSHZ3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TSHZ3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TSHZ3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TSHZ3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TSHZ3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TSHZ3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TSHZ3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TSHZ3 em células tumorais com expressão de TSHZ3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.