Plasmide CRISPR d'Activation (m) TSHZ1: sc-431049-ACT

Tshz1 code le facteur de transcription à homéoboîte et doigts de zinc TSHZ1, un régulateur nucléaire de programmes génétiques du développement qui façonnent la mise en place des tissus et les décisions de destinée cellulaire chez la souris. TSHZ1 intègre le contrôle transcriptionnel de processus liés à la morphogenèse, notamment la différenciation, l’organogenèse et le maintien d’une identité spécifique de lignée, via une régulation dépendante du contexte au niveau des promoteurs et des enhancers. Une activité dérégulée de TSHZ1 a été impliquée, dans des études génétiques, dans des phénotypes congénitaux et neurodéveloppementaux, ce qui en fait un nœud utile pour disséquer les réseaux transcriptionnels reliant la signalisation du développement à la différenciation terminale. La modulation de l’expression de Tshz1 soutient des travaux mécanistiques sur les circuits de régulation génique dans des modèles embryonnaires et dérivés de cellules souches, ainsi que la cartographie des voies dans des systèmes où les facteurs homéoboîte coordonnent les états de la chromatine et de la transcription.

TSHZ1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Tshz1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TSHZ1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Tshz1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Tshz1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TSHZ1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Tshz1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TSHZ1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TSHZ1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Tshz1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.