Plasmide CRISPR/Cas9 KO TSHβ (m): sc-423526
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- TSHβ Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique TSHβ, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TSHβ Antibody (D-6): sc-365801
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO TSHβ (m) | sc-423526 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Tshb code la sous-unité bêta de l’hormone thyréostimulante (TSHβ), composant d’une hormone glycoprotéique hypophysaire qui confère la spécificité de récepteur à la signalisation de la TSH dans la glande thyroïde. Dans les thyréotropes, l’expression de Tshb est contrôlée par la thyréolibérine hypothalamique (TRH) et par le rétrocontrôle négatif exercé par les hormones thyroïdiennes, intégrant l’homéostasie endocrine aux programmes transcriptionnels qui régissent la différenciation hypophysaire et la production hormonale. L’activation du récepteur de la TSH, induite par TSHβ, favorise la biosynthèse des hormones thyroïdiennes et la régulation métabolique systémique, reliant cet axe à des processus tels que la croissance, l’équilibre énergétique et la thermogenèse. Le dérèglement de Tshb et du rétrocontrôle hypothalamo–hypophyso–thyroïdien en amont est pertinent dans des modèles expérimentaux de dysfonctionnement central de l’axe thyroïdien et de phénotypes endocriniens affectant le développement et le métabolisme.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TSHβ (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tshb dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tshb, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tshb à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TSHβ.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tshb pour l'étude de la signalisation de TSHβ, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Tshb essentiels à la fonction de TSHβ
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tshb pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le TSHβ plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TSHβ plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tshb. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le TSHβ plasmide HDR (m) et le TSHβ (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tshb pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tshb définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.