Plasmide CRISPR d'Activation (h) TSG-6: sc-400765-ACT

TNFAIP6 code la protéine 6 inductible par le facteur de nécrose tumorale (TSG-6), une protéine sécrétée se liant à l’acide hyaluronique, rapidement induite par des stimuli inflammatoires tels que le TNF et l’IL‑1. TSG-6 module le remodelage de la matrice extracellulaire en catalysant le transfert de chaînes lourdes de l’inter‑α‑inhibiteur vers l’acide hyaluronique, ce qui modifie l’organisation de la matrice péricellulaire, l’adhérence des leucocytes et l’hydratation tissulaire. Par ces activités, TSG-6 s’inscrit à l’interface de programmes de signalisation pilotés par les cytokines, notamment les réponses inflammatoires associées à NF‑κB et les processus de réparation tissulaire. Une expression dérégulée de TNFAIP6/TSG-6 a été rapportée dans des affections inflammatoires et fibrotiques ainsi que dans le stroma associé aux tumeurs, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique pour étudier la régulation du microenvironnement.

TSG-6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TNFAIP6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TSG-6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TNFAIP6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TNFAIP6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TSG-6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TNFAIP6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TSG-6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TSG-6 dans les cellules tumorales présentant une expression de TNFAIP6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.