Plasmide Double Nickase (h) tsg 101: sc-400290-NIC

TSG101 code le gène de susceptibilité tumorale 101 (tsg101), un composant essentiel du complexe ESCRT-I, qui coordonne le tri endosomal et la biogenèse des corps multivésiculaires afin de réguler la diminution des récepteurs à la surface cellulaire et le renouvellement des protéines membranaires. Grâce à la scission membranaire dépendante d'ESCRT, TSG101 contribue également à l'abscission cytokinétique, à la formation d'exosomes et au bourgeonnement des virus enveloppés, ce qui l'associe aux voies de trafic vésiculaire et de remodelage des membranes. Son activité s'articule avec la reconnaissance des cargos dépendante de l'ubiquitine et l'atténuation des signaux, influençant la dynamique des récepteurs aux facteurs de croissance et la protéostasie. La dérégulation de TSG101 a été associée à des altérations du trafic endolysosomal et à des états de signalisation aberrants observés dans divers cancers et modèles liés aux infections, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de l'homéostasie cellulaire.

tsg 101 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TSG101 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TSG101. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TSG101. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TSG101.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.