Plasmide CRISPR d'Activation (h) tsg 101: sc-400290-ACT

TSG101 (tumor susceptibility gene 101) code la protéine tsg101, un composant central du complexe ESCRT-I qui coordonne le tri endosomal, la reconnaissance des cargos ubiquitinylés et la biogenèse des corps multivésiculaires. Grâce au remodelage membranaire dépendant d’ESCRT, TSG101 contribue à la diminution des récepteurs, à la cytocinèse (abscission), au trafic lié à l’autophagie et à la formation des exosomes, avec des rôles supplémentaires dans le bourgeonnement des virus enveloppés. La perturbation du trafic régulé par TSG101 peut modifier la dynamique de signalisation des récepteurs de surface et les réponses au stress, reliant cette voie à des processus oncogéniques, à des défauts de protéostase associés à la neurodégénérescence et à des études sur la réplication virale. En tant qu’adaptateur largement exprimé du trafic membranaire, TSG101 est fréquemment utilisé comme point d’entrée mécanistique pour étudier le transport intracellulaire et la communication médiée par des vésicules dans les cellules humaines.

tsg 101 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TSG101 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

tsg 101 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TSG101 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TSG101, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de tsg 101. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TSG101 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de tsg 101 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie tsg 101 dans les cellules tumorales présentant une expression de TSG101 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.