Plasmide CRISPR/Cas9 KO TS (m): sc-423565

Présentation

Tyms code pour la thymidylate synthase (TS), une enzyme clé dépendante des folates qui catalyse la conversion du dUMP en dTMP, assurant le maintien des réserves de nucléotides de thymidine nécessaires à la réplication et à la réparation de l’ADN. L’activité de la TS relie le métabolisme des unités monocarbonées à la progression en phase S, à la stabilité du génome, ainsi qu’à la synthèse de l’ADN mitochondrial et nucléaire via le réseau de biosynthèse de novo des pyrimidines. Dans les systèmes murins, la régulation de Tyms et l’abondance de la TS sont fréquemment étudiées dans des tissus prolifératifs et des modèles cellulaires à cycle rapide, où un déséquilibre des nucléotides peut déclencher un stress réplicatif et une signalisation des dommages à l’ADN. Un flux métabolique associé à la TS dérégulé est pertinent pour comprendre les mécanismes d’altération du contrôle du cycle cellulaire et d’instabilité génomique, souvent explorés en biologie du cancer et dans la recherche sur la voie des folates.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TS (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tyms dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tyms, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tyms à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TS.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tyms pour l'étude de la signalisation de TS, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tyms essentiels à la fonction de TS
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tyms pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TS plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TS plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tyms. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TS plasmide HDR (m) et le TS (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tyms pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tyms définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.