Plasmide CRISPR d'Activation (h) TRPV6: sc-402632-ACT

TRPV6 code un canal épithélial de la famille des TRP vanilloïdes hautement sélectif pour le Ca²⁺, qui permet l’entrée du calcium à travers la membrane plasmique. En régulant la signalisation cytosolique du Ca²⁺, TRPV6 influence des programmes transcriptionnels dépendants du calcium, le transport épithélial et la différenciation cellulaire. L’activité de TRPV6 s’interface avec des voies en aval de l’influx calcique, notamment la signalisation dépendante de la calmoduline et des réseaux plus larges d’homéostasie ionique. Une expression dérégulée de TRPV6 et une altération de la gestion du calcium ont été associées à des pathophysiologies épithéliales et à des phénotypes liés au cancer, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique dans des études portant sur la prolifération, l’invasion et la signalisation régulée par les hormones.

TRPV6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TRPV6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TRPV6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TRPV6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TRPV6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TRPV6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TRPV6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TRPV6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TRPV6 dans les cellules tumorales présentant une expression de TRPV6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.