Plasmide Double Nickase (h) TRPS1: sc-403037-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) TRPS1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide TRPS1 Double Nickase (h) et le plasmide TRPS1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TRPS1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (h) TRPS1 | sc-403037-NIC | 20 µg | $410.00 |
TRPS1 code un facteur de transcription à doigt de zinc de type GATA qui agit principalement comme un répresseur transcriptionnel au cours du développement, en intégrant des signaux qui façonnent la différenciation épithéliale et la mise en place du patron squelettique. TRPS1 régule des programmes géniques impliqués dans la maturation des chondrocytes, la morphogenèse des follicules pileux et le contrôle du cycle cellulaire, via des interactions dépendantes du contexte avec des complexes de remodelage de la chromatine et des corépresseurs. En biologie humaine, une expression ou une fonction altérée de TRPS1 est associée aux syndromes tricho-rhino-phalangiens et a été reliée à des réseaux transcriptionnels dérégulés dans des tissus épithéliaux hormonosensibles, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la spécification des lignages et du contrôle transcriptionnel. En tant que protéine nucléaire se liant à l’ADN, TRPS1 est fréquemment étudiée dans des voies régissant la différenciation, la prolifération et l’expression génique spécifique des tissus.
TRPS1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TRPS1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TRPS1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TRPS1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TRPS1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.