Plasmide Double Nickase (m) TRPC6: sc-423517-NIC

Trpc6 code TRPC6, un canal cationique non sélectif sensible au diacylglycérol, qui médie l’entrée de Ca²⁺ opérée par les récepteurs et façonne la dynamique du calcium intracellulaire dans de nombreux types cellulaires chez la souris. TRPC6 intègre la signalisation en aval des RCPG et des récepteurs à activité tyrosine kinase via des voies dépendantes de la PLC, influençant la signalisation calcineurine/NFAT, le remodelage du cytosquelette et les réponses mécanoréactives. Dans le rein, l’activité de TRPC6 est étroitement liée à la fonction des podocytes et à la signalisation du diaphragme de fente, et une activité du canal altérée a été associée à des phénotypes de lésion glomérulaire dans des modèles expérimentaux. TRPC6 est également étudié dans le muscle lisse vasculaire et dans des contextes immunitaires, où l’influx de Ca²⁺ module la contractilité, la migration et des programmes transcriptionnels pertinents pour l’inflammation et le remodelage.

TRPC6 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Trpc6 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Trpc6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Trpc6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Trpc6.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.