TRPC5 Double Nickase Plasmid (h): sc-403745-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TRPC5 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TRPC5 Double-Nickase-Plasmid (h) und TRPC5 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TRPC5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: TRPC5: sc-293259
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TRPC5 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403745-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TRPC5 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403745-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TRPC5 (Transient Receptor Potential Cation Channel Subfamily C Member 5) kodiert einen Ca2+-durchlässigen, nichtselektiven Kationenkanal, der als Sensor für extrazelluläre und intrazelluläre Signale dient und so die Membranerregbarkeit sowie calciumabhängige Signalwege reguliert. In menschlichen Zellen trägt TRPC5 zum rezeptorvermittelten Calciumeinstrom nachgeschaltet von GPCR- und Rezeptor-Tyrosinkinase-Signalwegen bei und greift dabei in die PLC-Signalgebung, den Phosphoinositid-Stoffwechsel und nachgelagerte Transkriptionsprogramme wie NFAT und MAPK ein. Die TRPC5-Aktivität beeinflusst über Ca2+-abhängige Effektoren die Zytoskelettdynamik, Zellmigration und Barrierefunktion und verknüpft damit das Gating des Kanals mit mechanochemischen Antworten. Eine fehlregulierte TRPC5-Signalgebung wurde mit Zusammenhängen in der Neurobiologie, der renalen und kardiovaskulären Physiologie sowie zellulären Stressreaktionen in Verbindung gebracht, was TRPC5 zu einem nützlichen Ziel für die Analyse von Signalwegen in krankheitsrelevanten Modellen macht.
TRPC5 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TRPC5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TRPC5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TRPC5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TRPC5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.